Q1: 什么是荧光淬灭？它和光漂白是一样的吗？
A1: 两者不一样。荧光淬灭是光淬灭(quench)是指荧光分子由内部因素和外部因素同时作用 造成的不可逆破坏。内部因素主要是分子从激发态回到基态以非辐射跃迁形式释放能量。外部因素则包含多方面，主要有：光照射是致荧光淬灭的最常见原因，荧光的产生需要光照射，但同时光照射也会促进激发态分子与其他分子相互作用而引起碰撞，使荧光淬灭； 荧光物质的分子与外部分子(或离子)形成非荧光的化合物；共振能量的转移；溶剂种类、pH 值及温度等环境条件。光漂白(Photobleaching)是染料或荧光团分子的光化学变化，使其永久不能发出荧光。这是由于共价键断裂或荧光团与周围分子之间的非特异性反应。
Q2：我要进行免疫试剂开发，羧基微球的偶联工艺？
A2: 微球表面性质：COOH微球表面更亲水，微球本身分散性好，对于蛋白的非特异吸附相对较低； 偶联工艺：COOH微球需要用EDC或EDC+Sulfo-NHS等交联剂进行活化，活化后的产物不太稳定易水解，需立即和抗体或抗原进行偶联，一般在弱酸-中性pH下进行活化和偶联，偶联反应时间为12-14 h。由于EDC和Sulfo-NHS容易水解，且活化产物与氨基的反应速度很快，在工艺放大中容易出现较大的批间差。
Q3：CytomStarYES系列微球表面的羧基基团含量是如何测定的？
A3：羧基含量通过电导率滴定法测定。我们制定了严格的标准操作流程确保测试结果的可重复性。
Q4：CytomStar系列微球的数量浓度是采用什么方法确定的？
A4：我们是采用流式细胞仪中的绝对计数功能进行定值的。为了保证计数的准确性，每周使用BD计数管对机器进行验证，保证数据的准确性。
Q5：在偶联完抗体后微球会有些团聚，这个是为什么？有什么解决方案
A5：微球表面是做过亲水包覆的，微球本身的分散性好，偶联完抗体后微球表面性质发生了变化，微球的亲疏性是由抗体的亲疏水性决定的；可以在偶联的Buffer里加入适量的表面活性剂，也可以适当的减少抗体的投入量。
Q6： 抗体与微球偶联后，使用过程避免发生非特异性吸附的最好方法是什么？
A6: 1.将抗体吸附到微球上并用 BSA、明胶或其他蛋白进行封闭处理，但这种方法并不能保 证其他蛋白也不被吸附；2.通过共价偶联的方法可以将抗体永久的结合到羧基修饰的微球表面。然后加入适量（1-5%）的含有封闭蛋白或不含有封闭蛋白的表面活性剂如Tween-20。表面活性剂的量可以根据实际需要增加直到不发生非特异性吸附为止，由于是共价偶联因此不必担心抗体会从微球上脱落。
Q7：CytomStarYES系列微球，使用前是否需要清洗，如何清洗？
A7：纳微COOH微球保存在0.01% Tween-20＋0.05% Proclin-300的去离子水中。使用前建议客户进行清洗置换Buffer。清洗方法：①将微球从冰箱中取出，置于血液混匀仪上混匀至少30 min，用移液枪移取所需使用的微球；②离心除去上清液；③加入对应体积的缓冲液（客户的微球稀释液或洗涤液），涡旋混匀（大量则需要搅拌混匀）后水浴超声1分钟，超声功率为40 kHz；④按②③步骤的方法清洗微球三次，最后将微球置换至客户需要的缓冲液中。
Q8：CytomStarYES系列微球，不同批次间微球的荧光强度的批间差是多少？保质期多久？
A8：不同批次间微球的荧光强度的变化在±10%以内，（2-8℃保存）保质期24个月。针对这个保质期做过24个月在2-8℃保存条件下的实时稳定性的测试。
